一秒钟了解pcr耗材,八联排管、pcr96孔板的选择

发布日期:2021-03-01 11:30:25   来源 : unknown    作者 :unknown    浏览量 :79
unknown unknown 发布日期:2021-03-01 11:30:25  
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今天,我们来聊聊PCR实验中很关键的要素——耗材。作为PCR常客,了解PCR耗材相关的特性和术语是有必要的。
市面上的PCR耗材有很多,各种品牌、规格、颜色等,让人眼花缭乱。我们来慢慢认识它。材质PCR耗材的原材料通常是聚丙烯。它是一种很好的耐热惰性物质(使用温度范围为-30~140℃),能够承受PCR反应热循环过程中的热能变化,很好地封闭和保护PCR反应体系中的物质。

颜色常见的有白管和透明管。在传统PCR实验中,两者没有区别。但是,在相同的荧光定量/qPCR实验中,对于顶端信号读取的qPCR仪器(在管的上方采集荧光信号)来说,白管的灵敏度一致性相对更高(下图A和B)。这是为什么呢?

与透明管相比,A  白管得到的Ct值更低;B  白管得到的重复性更好

qPCR的核心数据是Ct值,而荧光信号是Ct值计算的数据来源,所以管内的荧光能否完好地传递至检测器是至关重要的。白色的管壁能够阻止荧光穿过管壁和折射(下图A),进而防止荧光传至加热模块(放管子的金属孔壁),被模块吸收或发生不一致反射等情况。相比于透明管,在白管的顶端能够采集到更强,更聚焦的荧光信号(下图B)。

A  透明管和白管中荧光信号走向;B  分别加入等量荧光素后,荧光强度对比

So,假如你正在使用的是顶读qPCR仪,那么安利一下,不妨用白管试试哦~

  • 质量(是否干净)这里强调一下耗材质量的重要性。qPCR耗材必须保证没有污染物和抑制剂。高压和辐射能够去除细菌和DNA酶,但不能去除灰尘和DNA残留,它们可能会抑制PCR反应或产生非特异性扩增。物质是具有吸光度的,即便是很小的污染物也会吸收反应体系中的荧光,影响荧光信号的采集。用一个夸张版的实验来演示一下杂质污染对实验的影响,如下图所示,在八联排的一个反应孔中放入一粒杂质,不出所料,扩增结果曲线出现了显著的异常。 
  • ↑  8复孔重复性反应结果,左边孔中的杂质让曲线“跑偏”

Tips  注意不要让耗材长期暴露在空气中,取出耗材后,一定要快速封好包装袋,避免用裸手接触。有条件的话,可在超净台中操作。容量/尺寸/通量
容量决定了可加样的多少(反应体积)。加样过多会导致热传导效率下降,溢出或交叉污染;而加样不足会引起样品蒸发损耗。qPCR仪的加热模块也会决定可适配的耗材和适用的反应体系大小。通量很容易理解,就是单次实验能上多少个样品。常见的容量和通量规格如下表所示:

 

 

单管/八联排

0.2mL、0.1mL

96孔板

0.2mL、0.1mL

384孔板

0.02mL

容量规格也常用标准和低容量来区分,如下图所示。low profile(低容)耗材的高度更低,这种短小的设计减少了反应体系上方的空间(“死体积”——无用部分),降低热循环过程中的蒸发影响,同时能够让加热模块更大程度地将其包裹,提高热传导效率。因此,低容管也被称为“快速”管或板。


Tips  常见的反应体积一般为20 µL,推荐使用0.1 mL或low profile的低容反应管。管壁厚度PCR耗材的管壁厚度要均一,才能提供一致的热传导。超薄管壁较标准版薄50%,可进一步减少热屏障,带来更快更好的反应效果。当然,建议选超薄的。
透明度qPCR的管盖和封膜需要具有很高的光学透性,确保的荧光信号的穿透和传递,减少失真(针对顶读qPCR仪)。管壁的透明度越高反倒会影响实验结果,理由在前面解释过。传统PCR可忽略此特点。裙边PCR板的裙边指的是板的周围延伸部分。额.......这个裙边作用是在构建反应体系时为移液过程提供稳定性支撑,以及结合自动化工作站时提供机械强度和抓手。常见的有三种:无裙边、半裙边和全裙边(对应下图A、B、C)。
Tips  简单理解就是,裙边的意义更多在于为工业化、自动化批量处理提供便利,与机械臂的结合。在常规科研实验室中可能不太需要,使用无裙边板即可。

封板膜
PCR封板膜由透明塑料或铝箔制成。黏性透明薄膜比较常见,适配于96或384孔板,要有足够好的光透性。可以在封膜时用个小卡片把孔周围的膜压紧,避免漏气等现象。实验室里的贴膜boy们应该很熟悉了吧。可以简单理解为......

黏性铝膜可能比较少见,尽管不适合qPCR,但对于光敏样品还是合适的耗材,由于可以穿刺,便于PCR中样品转移。(适用于传统PCR)


总结
耗材作为PCR体系的载体,对提高实验数据质量是非常重要的。希望本分享能够让你了解PCR耗材的一些小知识,为更好地选择耗材提供帮助。ok,就到这儿了,下回见咯~

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