作为ELISA实验的最后一步,检测结果的计算对整个实验十分重要。
我们以夹心法为例,来介绍ELISA实验结果计算。
● ELISA的样本通常要设置1~2个复孔进行检测,分别求出标准品、实验组样本吸光度的平均值。单个样本的检测值不应超出平均值的20%;
● 样本的OD(吸光度)平均值要减去标准品浓度为0时的OD平均值;
● 建立标准曲线:在对数坐标图上拟合四参数的逻辑函数曲线(X轴上为标准品浓度,Y轴为对应的OD值)
详细步骤如下:
第一步:输入标准品浓度和OD值
第二步:选择拟合曲线类型——非线性曲线拟合
选中输入的数值框,按如下操作依次点击选项。
第三步:选择Statistics和Logistic,勾选“Find X from Y”
完成上述操作后,点击Fit按键,拟合曲线和相关信息将自动生成。
第四步:查看标准曲线信息(如参数值,R-Square等)
第五步:修改横纵坐标标题,设置坐标轴类型为对数
双击第四步中的拟合曲线图,对其进行编辑。双击修改横纵坐标的标题,双击X轴、Y轴,设置坐标类型为“Log10”,并设置横纵坐标范围。
第六步:根据标准曲线计算样品浓度
选择第四个工作表(Fit NL Find X from Y1),在左列输入样本的OD值,对应的浓度将在右列自动生成。
注意:
如果样本的OD值超出标准曲线的上限,请在实验前适当稀释样本,以获得精确结果。分析数据时,样本实际浓度应为标准曲线上获得的浓度乘以稀释倍数。
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